牛奶中替米考星残留检测方法

时间:2019-03-04 10:37:27 来源:新凤凰彩票 作者:匿名


1.安全要求

在实验过程中应穿着工作服,口罩和手套;提取和净化操作应在通风橱中进行,以避免溶剂气体吸入和皮肤接触;将废弃的化学试剂收集在专用容器中进行集中处理。

2,急救措施

在皮肤暴露于有机溶剂或酸或碱溶液后,用水洗涤,并将有机溶剂或酸或碱溶液溅入眼睛中并用水冲洗。

3.适用范围

该标准程序适用于检测牛奶中的替米考星残留。

4.责任进行检查的检查员必须按照标准操作程序进行检查,质量监督员负责监督标准操作程序的正确执行。

5,检测原理

保留在样品中的替米考星用乙腈(c)萃取。纯化固相萃取柱,用液相色谱 - 紫外检测器检测,用外标法定量。

6,方法灵敏度

牛奶中替米考星的定量限为25μg/L.

7,注意事项

除特殊说明外,在洗脱和洗脱过程中应避免萃取柱床。

8.材料,仪器和试剂的准备和基本要求

除非另有说明,以下试剂均为分析纯;水是符合GB/T6682的一级水。

8.1参考材料,试剂,材料和标准储备溶液,标准工作流体的制备

8.1.1替米考星替米考星(C46 H80 O13)不得低于90%。

8.1.2乙腈纯色谱

8.1.3甲醇色谱纯

8.1.4四氢呋喃色谱纯

8.1.5 85%磷酸

8.1.6二丁胺

8.1.7醋酸铵

8.1.8 C18固相萃取柱Supelclean 500rag,6mL

8.1.9 1mol/L磷酸二丁胺缓冲液向700mL水中加入168mL二丁胺,然后缓慢加入约70mL磷酸,搅拌溶解二丁胺,冷却至室温,用磷酸(每次1~2mL)量为加入,共约18 mL)调节pH至2.55±0.1,用水稀释至1 000 mL。

8.1.10洗脱液称取溶于200 mL甲醇中的7.71 g乙酸铵,加入790 mL乙腈,等待溶液恢复至室温,用乙腈稀释至1000 mL。8.1.11标准储备液制备(1mg/mL)将替米考星标准品在减压下在600℃下干燥3h,精确称量约28mg(按实际含量计算为90.3%),置于25mL棕色容量瓶中,溶解在乙腈中,定容,制成

将Lmg/mL的标准储备溶液储存在40℃冰箱中,有效期为3个月。

8.1.12标准工作溶液制备(1μg/mL)精确测定100μL替米考星标准储备液,置于100mL容量瓶中,用乙腈稀释至刻度,摇匀,得到1μg/mL标准工作液。存放在40C冰箱中。

有效期为一个月。

8.1.13为50μL,100μL,250μL,500μL和1000μL各自制备1μg/mL标准工作溶液的精密溶液,并将流动相加至1 mL以获得50μg/L的替米考星, 100μg/L,250μg/L,5001μL/L,1000μg/L的对照溶液。使用前准备好。

8.2仪器和设备

8.2.1液相色谱仪(带紫外检测器)

8.2.2分析天平准确度0.01g

8.2.3分析天平准确度0.000 01g

8.2.4涡旋混合器IKA MS2型

8.2.5超声波清洁器

8.2.6离心机Himac CFl6RX

8.2.7酸度计梅特勒托莱多320型

8.2.8塞住离心管50mL

8.2.9样品浓缩器PIERCE IL61105

8.2.10真空泵Millipore WP6122050

8.2.11微孔膜孔径0.45μm

9个检查步骤

9.1样品的制备

9.1.1混合后取出试样并用作试验材料。

9.1.2混合后取空白样品作为空白样品(阴性对照)。

9.1.3取5 mL空白样品,加入0.25 mL1μg/mL替米考星的标准工作溶液,加入样品作为空白(阳性对照)。9.2提取

9.2.1在聚丙烯离心管中精确测量5 mL试验材料,加入15 mL乙腈,涡旋30 s。

9.2.2超声波lmin,以6000r/min离心5min,取上清液,用50mL水稀释后备用。

9.3净化

9.3.1固相萃取柱用10mL甲醇和10mL水预洗涤。

9.3.2将储备液通过固相萃取柱,用10 mL水,10 mL乙腈冲洗,沥干5 min。

9.3.3用5mL洗脱液洗脱固相萃取柱,挤干,并在400℃水浴下用氮气干燥。流动阶段

将1.0mL溶解的残余物通过过滤器过滤,并用作用于液相色谱测量的样品溶液。

9.4确定

9.4.1色谱条件

9.4.1.1柱:C18柱,150mm×4.6mm(i.d.),粒径5μm;

9.4.1.2流动相:取乙腈100mL,四氢呋喃40mL和lmoL/L磷酸二丁胺缓冲液25mL,加水700mL,用水稀释至1000mL,过滤,脱气,即得。

9.4.1.3流速:1.0mL/min

9.4.1.4柱温:300℃

9.4.1.5检测波长:280nm

9.4.1.6注射量:50μL

9.5测定

9.5.1依次从低浓度到高浓度确定一系列对照溶液,根据标准得到的顺式和反式异构体的峰面积之和以及对照溶液的相应浓度作为标准。曲线,计算回归方程和相关系数。

9.5.2取样品溶液和250μg/L对照溶液进行单点校准。根据外部标准方法按峰面积计算。对照溶液和样品溶液中的替米考星响应值应在仪器检测的线性范围内。

9.5.3空白试验

使用完全相同的测量程序进行平行操作,除了没有添加样品。

9.6记录和计算

9.6.1录制项目

9.6.1.1逐项填写中国兽药检验所“检验记录”的主页。

9.6.1.2参考名称,来源,批号和内容。9.6.1.3原液,工质和对照溶液的制备和制备日期。

9.6.1.4样品的制备,提取,纯化和测定(包括测量过程中涉及的测量仪器的数量)。

9.6.1.5原始数据(包括仪器映射和打印数据)。

9.6.1.6计算公式和计算过程(软件计算除外)。

9.6.2计算

计算样品中替米考星的残留量如下:

在公式:

X-样品中替米考星的含量(μg/L);

标准溶液中的Cs——替米考星含量(μg/L);

Ai——测试溶液中替米考星的顺式和反式峰面积之和;

为——标准溶液中替米考星的顺式和反式峰面积之和;

V1——用于溶解残留物的流动相体积(mL);

V2——使用的样品量(mL)。

(注:计算结果从空白值中扣除,测量结果用并行测量的算术平均值表示,保留3个有效数字)

9.7结果确定

9.7.1线性范围在50-1000μg/L范围内研究线性,并计算回归方程,相关系数≥0.995。

9.7.2准确度该方法在25至100μg/L的添加浓度范围内的回收率为65%至100%。

9.7.3精密度该方法的测定内变异系数≤10%,问题数的变异系数≤10%。

9.7.4确定

方法学调查符合上述要求时,试验样品中药物的残留量X下一篇:煤的可熔性测定方法